Cette vidéo démontre la transduction virale par injection in utero dans des embryons de souris. Une souris enceinte est préparée pour la chirurgie et une incision médiane est pratiquée pour exposer les cornes utérines. Un mélange d’un virus contenant le gène souhaité et d’un colorant de suivi est injecté dans les embryons à l’intérieur des sacs utérins aux endroits ciblés. Les cornes utérines sont ensuite remises en place avant la suture.
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Article de méthode
Transduction virale in utero chez une souris
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29 août 2025
Dans cet article
Résumé
Protocole
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. En transduction in utero
- : Préparez un virus adéno-associé de type 1 (AAV1) codant pour la cible souhaitée (4 x 1011 particules virales/μL d’AAV1) dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à pH 7,4. Ajouter 0,1 mg/μL de Fast Green et maintenir le mélange AAV1-Fast-Green à 37 °C.
- Préparez une pointe capillaire fine de la forme souhaitée (8 mm de longueur, avec un diamètre extérieur de 80 μm et un diamètre intérieur de 50 μm) à l’aide d’un extracteur de m....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 26Gx 1'' aiguille | Henke-Sass, Wolf GmbH | ||
| 410 Unité d’anesthésie pour pompe à air | Instruments biomédicaux (Univentor) | 8323102 | |
| Virus adéno-associé sérotype 1 (AAV1) | UKE (Viral Pour | les références et les zones cibles d’AAV1, voir : https://www.addgene.org/viral-vectors/aav/aav-guide/ et aussi : Vecteurs de livraison de gènes concepteurs : ingénierie moléculaire et évolution des vecteurs viraux adéno-associés pour un transfert de gènes amélioré. Kwon I, Schaffer DV. Pharm Res. 2008 mars ; 25(3):489-99. Les vecteurs viraux AAV recombinants pseudotypés avec des capsides virales des sérotypes 1, 2 et 5 présentent une efficacité différentielle et un tropisme cellulaire après administration dans différentes régions du système nerveux central. Burger C, Gorbatyuk OS, Velardo MJ, Peden CS, Williams P, Zolotukhin S, Reier PJ, Mandel RJ, Muzyczka N. Mol. Ther. août 2004 ; 10(2):302-17. Les vecteurs de virus adéno-associés recombinants auto-complémentaires (scAAV) favorisent une transduction efficace indépendamment de la synthèse de l’ADN. McCarty DM, Monahan PE, Samulski RJ. Gene Ther. 2001 août ; 8(16) :1248-54. | |
| Pompe à air | Instruments biomédicaux (Univentor) | Eheim 100 | |
| Aspirator tune | assemblies Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| Masque respiratoire souris Aluminium anodisé | Instruments biomédicaux (Univentor) | - | |
| Buprénorphine | Temgesic | analgésiques | |
| Capillaires | Science-Products | GB100TF-10 | avec pince à épiler Dumont fillament |
| (#3, 12 cm, droite, 0,2 x 0,12 mm) | FST | 11203-23 | |
| Rasoir électrique | Phillips | - | |
| Sutures Ethicon (Ethilon, 6-0 et 3-0) | Lubrifiant | Ethicon-polyamide | |
| Bepanthene | - | ||
| Fast | Green Sigma-Aldrich | F7252 | pour la visualisation de liquides injectés Commutateur d’acheminement de |
| gaz 4/2 connecteurs | Instruments biomédicaux (Univentor) | 8433020 | |
| Pince hémostatique Halsted Mosquito (12,5 cm, droite) | FST | 13011-12 | |
| Boîte à induction pour souris avec couvercle se déplaçant horizontalement.Dimensions intérieures : LxLxH : 155x115x130 mm.Épaisseur de paroi : 6 mm | Instruments biomédicaux (Univentor) | - | |
| Pince à iris (10cm, incurvée, dentelée) | FST | 14007-14 | |
| Ciseaux à iris (11cm, droite, carbure de tungstène) | FST | 14501-14 | |
| Isofluran OP Tisch, chauffée électriquement, smDimensions extérieures : 257x110x18 mm.Surface de chauffage : 190x90 mmLe retrait de l’isoflurane s’échappant du masque respiratoire se fait vers le bas conformément à la réglementation | Biomedical Instruments (Univentor) | - | |
| Isoflurane (Attane) | JD anesthésie médicale | par inhalation | |
| Microscope optique Basic DM E | Leica-4x | (N.A. 0.1 ∞/-), 10x (N.A. 0.22 ∞/0.17), 40x (N.A. 0.65 ∞/0.17), 100x (N.A. 1.25 ∞/0.17) objectifs | |
| Micropipette pulle | Science-Products | P-97 | |
| Pince hémostatique Mosquito (12.5cm, incurvée) | FST | 13010-12 | |
| Thermopuller P-97 | Sutter Instruments | ||
| Tygon 6/4 Matériau de la tuyauterie pour l’assemblage de toutes les piècesDiamètre extérieur : 6mmDiamètre intérieur : 4mmEpaisseur de paroi : 1mm | Biomedical Instruments (Univentor) | ||
| Ciseaux Vannas (8 cm, droits) | FST | 15009-08 |
